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如何选择合适的S-X3凝胶填料152-2750?一起来看看吧

点击次数:318次 发布时间:2021-12-10

   做分离纯化工作的人都知道,选择合适的S-X3凝胶填料152-2750是至关重要的。通过优化组合找到高效的纯化工艺,使用少的步骤达到蛋白质产量和纯度的大化。下面看看一下填料选择介绍。

  1、测定-分子量、PI
  当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时,可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的SuperoseHR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中,可简易地测出PI,并选择纯化用缓冲液的佳PH。
  2、选择-层析方法
  若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解,可尝试几种不同的纯化方法:
  一]使用通用的凝胶过滤方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、SephacrylHR依据分子量将样品分成不同组份。
  二]用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
  三]体积大的样品,往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
  3、纯化-大量粗品
  处理大量原液时,为避免堵塞柱子,一般使用sepharosebigbeads、sepharoseXL、sepharosefastflow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质,直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率,缩短纯化周期。
  4、纯化-硫酸氨样品
  硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品,经处理过的样本处于高盐状态下,很适合直接上疏水层析。若作离子交换,需先用SephadexG-25脱盐。疏水层析是较新技术,随着介质种类不断增多,渐被融入各生产工艺中。利用HitrapHICTestKit和RESOURCEHICTestKit可在八种疏水介质中选择适合介质及佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。
  5、纯化-糖类分子
  固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素,可结合碳水化合物的糖类残基,很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器,纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose6MB亲和层析介质,专为俘获整个细胞或大复合物,如膜囊等。
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