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超滤离心管通常是不需要预处理即可使用的

点击次数:293次 发布时间:2020-12-15

  超滤离心管的使用方法:
  1).将超滤内管插入所提供的一个微量离心管中。
  2).向超滤管内管中加入不超过500μL的样本,并盖上盖子。
  3).将盖好盖子的超滤管放入离心转子中,让盖子的连接带朝着转子的中央;用一个类似的超滤管平衡。
  4).以14,000xg离心约10-30分钟,具体时间取决于所使用超滤管的NMWL。
  5).离心结束后将整个超滤管从离心机中取出,取出内管。
  6).为了回收浓缩后的溶质,将内管倒过来插在-个干净的微量离心管中。放在离心机中,让打开的盖子朝着转子的中央;用一个类似的超滤管进行平衡。以1,000xg离心2分钟,使浓缩后的样本从超滤内管转移到收集管中。超滤液可以保存在收集管中。
  超滤离心管是否要预处理:
  通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。
  超滤离心管的应用:
  蛋白质样品浓缩、脱盐及缓冲液置换;
  样品中去垢剂的去除;双向电泳样品的制备;
  未结合标志物的去除;
  尿液的浓缩;
  核算样品浓缩及脱盐;
  法医鉴定分析样品的预处理
  纯化血清多肽做生物标志物;抗体的快速浓缩
  
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